熒光定量PCR主要由樣品載臺、基因擴(kuò)增熱循環(huán)組件、微量熒光檢測光學(xué)系統(tǒng)、微電路控制系統(tǒng)、計算機(jī)及應(yīng)用軟件組成。其中基因擴(kuò)增熱循環(huán)組件工作原理與傳統(tǒng)基因擴(kuò)增儀大致相同，不同廠家不同型號的產(chǎn)品分別采用空氣加熱、壓縮機(jī)制冷、半導(dǎo)體加熱制冷等工作方式。微量熒光檢測系統(tǒng)由熒光激發(fā)光學(xué)部件、微量熒光檢測部件、光路、控制系統(tǒng)組成。
 

　　熒光定量PCR是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時檢測,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，能實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)，據(jù)實(shí)時性和準(zhǔn)確性等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域。
 

　　PCR板有透明和乳白色可選，其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量PCR，但如果熒光定量PCR儀是底部光源的，則應(yīng)選擇透明的。
 

　　PCR板根據(jù)裙邊設(shè)計又可分為無裙邊、半裙邊和全裙邊三種設(shè)計模式，不同廠家的熒光定量PCR會設(shè)計不同的切角或邊緣凸起，請選擇適合該P(yáng)CR儀的板子。
 

　　PCR板又分100ul體積(矮板)和200ul體積(高板)，根據(jù)機(jī)型的不同選擇，選擇不同高度孔板，避免高度錯誤對機(jī)器造成破壞和加熱不均導(dǎo)致數(shù)據(jù)失真。
 

　　當(dāng)使用96孔板做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)的時候，推薦使用光學(xué)膜代來密封反應(yīng)孔。正確的封膜方法是：先沿著96孔板的縱向壓膜，然后橫向，最后沿著板的邊緣按壓使之密封。
 

　　加樣后會在管壁上飛濺一些小液滴，另外反應(yīng)體系內(nèi)也會有一些氣泡，需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用專用的微孔板離心機(jī)解決上述問題。
 

　　PCR板屬于一次性消耗品，生產(chǎn)一次成型，不建議剪開使用容易造成實(shí)驗(yàn)誤差增加，不能清洗或部分重復(fù)利用。不要為了節(jié)省一點(diǎn)小錢，而給實(shí)驗(yàn)帶來后續(xù)分析上的困擾。