熒光定量PCR人主要由樣品載臺、基因擴增熱循環(huán)組件、微量熒光檢測光學系統(tǒng)、微電路控制系統(tǒng)、計算機及應用軟件組成。其中基因擴增熱循環(huán)組件工作原理與傳統(tǒng)基因擴增儀大致相同,不同廠家不同型號的產(chǎn)品分別采用空氣加熱、壓縮機制冷、半導體加熱制冷等工作方式。微量熒光檢測系統(tǒng)由熒光激發(fā)光學部件、微量熒光檢測部件、光路、控制系統(tǒng)組成。
常用的熒光激發(fā)方式有兩種:鹵鎢燈和LED;熒光檢測元件常用兩種方式:光電倍增管和冷光CCD攝像機,光單色元件有濾光片和光柵。在實時PCR擴增過程中,熒光信號被收集,轉化為成為擴增和熔解曲線。具體數(shù)據(jù)就是基線,熒光閾值和Ct值。
傳統(tǒng)的PCR進行檢測時,擴增反應后需要進行染色處理及電泳分離,并且只能作定性分析,不能準確定量,易造成污染出現(xiàn)假陽性,使其應用受到限制。實時定量PCR技術不僅實現(xiàn)了對模板的定量,且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和無污染的特點,使得熒光定量PCR逐漸取代常規(guī)PCR。
在PCR擴增反應的數(shù)個循環(huán)里,熒光信號變化不大,接近一條直線,這樣的直線即是基線,這條線是可以自動生成也可以手動設置的。之后反應會進入指數(shù)增長期,這個期間擴增曲線具有高度重復性,在該期間,可設定一條熒光閾值線,它可以設定在熒光信號指數(shù)擴增階段任意位置上,但一般會將熒光閾值的缺省設置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍。每個反應管內(nèi)的熒光信號到達設定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)被稱為CT值,這個值與起始濃度的對數(shù)成線性關系,且該值具有重現(xiàn)性。
熒光定量PCR人主要用于用于科研及臨床的基因擴增、定性PCR基因擴增、熒光/酶免終點定量DNA基因擴增、基因芯片等其他基因分析應用的基因擴增等?;驍U增儀適合國內(nèi)外各種PCR試劑盒傳染病類、腫瘤類、科研類。進口基因擴增儀主要由外殼、變溫反應腔、散熱系統(tǒng)、加熱系統(tǒng)、制冷系統(tǒng)、電子控制系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、人機界面等各部分組成?;驍U增儀廣泛應用于各級各類醫(yī)療機構、大學及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。